В этот день у женщины на пункции получают яйцеклетки, которые окружены гранулезными клетками (кумулюсом). Из-за плотного слоя гранулезных клеток качество и зрелость яйцеклеток сразу определить точно невозможно, их не видно. Мужчины сдают сперму, и по показателям спермограммы эмбриолог принимает решение о методе оплодотворения: ЭКО, ИКСИ или ИМСИ. В зависимости от метода оплодотворения яйцеклетки либо очищаются от гранулезных клеток (ИКСИ, ИМСИ, ПИКСИ), либо нет (ЭКО). После чистки проводится точная оценка состояния ооцита.

В зрелых, готовых к оплодотворению ооцитах определяется первое полярное тельце. В эмбриологическом протоколе зрелый ооцит обозначают MII. В ядрах зрелых ооцитов 23 хромосомы, в незрелых — 46 хромосом, поэтому их использование неэффективно. При нарушениях процессов созревания ооцита в фолликуле или при неправильно введенном триггере (ХГЧ) при стимуляции существует большая вероятность получения незрелых клеток, обозначаемых — MI и GV. Возможна и полная дегенерация ооцита (Deg).

При проведении ИКСИ или ИМСИ в каждую зрелую клетку эмбриолог вводит один сперматозоид. При ЭКО к неочищенным клеткам добавляют обработанные специальными растворами сперматозоиды. Затем оплодотворенные яйцеклетки ставят в инкубатор.

Через 18-20 часов после добавления сперматозоидов или ИКСИ (1-е сутки) оценивают произошло оплодотворение или нет. Если оплодотворение прошло нормально образуются два пронуклеуса. Это предшественники ядер будущих клеток-бластомеров, на которые начинает делиться оплодотворенная яйцеклетка. При правильном оплодотворении оба пронуклеуса четко различимы, их обозначают 2pN. 

Если пронуклеусов не видно, то скорее всего оплодотворение не случилось (0pN). Иногда мы наблюдаем 1 пронуклеус (1 pN), в этом случае оплодотворение произошло, но за такими эмбрионами нужно пристально наблюдать, как правило, они имеют сниженный потенциал развития. Если мы наблюдаем 3 и более пронуклеусов, то оплодотворение произошло неправильно. «Неправильно» оплодотворенные ооциты не пригодны для дальнейшей работы и утилизируются

Пронуклеусы исчезают и эмбрионы начинают делиться. Оценка качества эмбрионов проводится через 40-42 часа после оплодотворения. Эмбриологи используют численно–буквенную систему оценки качества, где цифра означает количество бластомеров, а буква - их качество. Для обозначения эмбриона отличного качества используется буква «А», хорошего - «B», низкого - «С». 

Эмбрионы продолжают делиться. Оценка качества эмбрионов проводится через 72-74 часа после оплодотворения. В идеале дробление эмбриона должно быть симметричным (получаются бластомеры одинакового размера) и равномерным (все бластомеры претерпевают деление).  

К концу третьих и на четвертые сутки культивирования эмбрион начинает компактизацию — границы его клеток становятся неразличимы. Обычно оценка эмбрионов на четвертые сутки не проводится из-за малой информативности данной стадии развития.  При проведении преимплантанционного генетического теста (ПГС) на этой стадии проводят хетчинг эмбрионов — проделывают отверстие в оболочке эмбриона.

На пятые-шестые сутки, в идеале через 120 часов и более после оплодотворения эмбрион образует бластоцисту. Это стадия развития эмбриона, эмбрион на этой стадии похож на полый шар, внутри которого к стенке прикрепляется плотный комок клеток (внутриклеточная масса), стенки большого шара называют трофэктодермой. Впоследствии трофэктодерма участвует в образовании плаценты, а внутриклеточная масса — в образовании плода.

Оценка качества бластоцист учитывает ее размер, который отражается цифрами от 1 до 5; состояние внутренней клеточной массы (ВКМ) (от «A» до «С») (первая заглавная буква) и окружающих ее клеток – трофэктодермы (от «A» до «C»)(вторая заглавная  буква). 

Перенос можно делать в любой день развития. Вероятность беременности выше при переносе на 5 день развития. Для успешной имплантации бластоцисте необходимо выйти из окружающей ее блестящей оболочки и закрепиться в эндометрии. Эмбриолог может помочь бластоцисте выйти из оболочки, сделав отверстие. Данная процедура называется хетчинг. Ее проводят непосредственно перед переносом. Ее стоимость не входит в программу бесплатного ЭКО по полису и оплачивается отдельно.

Обычно замораживают эмбрионы на 5-6 день развития, когда они достигают стадии бластоцисты. Таким образом, эмбрионы живут в лаборатории максимум 7 дней.  В итоге, на эмбриологическом листе можно увидеть таблицу, в которой каждая манипуляция фиксируется. Судьбу и развитие каждого эмбриона можно проследить. Такое возможно, если в лаборатории не используется групповое культивирование эмбрионов, а каждый эмбрион занимает свою каплю со средой.